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超純水在PCR檢測(cè)中的作用

更新時(shí)間:2020-05-28        閱讀:5352

超純水在PCR檢測(cè)中的作用

 

今天帶大家走入核酸檢測(cè)的常用方法PCR方法,以及如何在PCR檢測(cè)過(guò)程中降低檢測(cè)結(jié)果假陰性概率。

 

一、什么是PCR技術(shù)?

 

PCR技術(shù)又稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA的片段的分子生物學(xué)技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制,PCR的大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。

在病毒檢測(cè)中,核酸檢測(cè)被定義為臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn),RT-PCR技術(shù)被反復(fù)提到,它是一種將RNA反轉(zhuǎn)錄和PCR相結(jié)合的技術(shù)。首先在反轉(zhuǎn)錄酶.的作用下,將提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下不斷擴(kuò)增(變性-退火-延伸多個(gè)循環(huán))合成目的片段并進(jìn)行分析。

 

二、PCR用水

 

PCR技術(shù)目前多搭配試劑盒使用,也有用戶自行制備反應(yīng)體系,無(wú)論哪個(gè)過(guò)程都需要使用水。無(wú)論是近年來(lái)季節(jié)性爆發(fā)的甲流乙流,還是目前都在經(jīng)歷的病毒,在檢測(cè)過(guò)程中都涉及一個(gè)痛點(diǎn),那就是如何盡可能提高核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性,減少假.陰性結(jié)果出現(xiàn)的可能性。

我們首先分析一下假陰性結(jié)果出現(xiàn)的原因,以病毒核酸檢測(cè)為例,假陰性的主要原因有:

1病人病程:不同病程,患者體內(nèi)病毒載量不同;

2采樣部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采樣部位病毒載量均不同;

3采樣準(zhǔn)確性:拭子質(zhì)量,工作人員操作等;

4試劑盒的質(zhì)量:引物設(shè)計(jì)以及水質(zhì)控制。

為了順利將提取到的RNA反轉(zhuǎn)錄并實(shí)現(xiàn)DNA的成功擴(kuò)增,必須抑制核糖核酸酶(RNases)的降解作用,如果試劑盒用水內(nèi)含RNases,將極有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。

 

三、去除RNases的主要方法

 

1高壓滅菌:即便是在180°C下高壓滅菌4h之后,RNases仍保持某些活性,且某些細(xì)菌失活會(huì)釋放更多的RNases;

2 DEPC(二乙基焦碳酸酯處理法) :利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 處理方法使酶失活是用來(lái)抑制水溶液中RNases活性的常見(jiàn)方法。然而,二乙基焦碳酸酯是一種可疑致癌物,處理須小心;同時(shí)該方法雖然能夠使酶失活,卻無(wú)法將其從水中去除,同時(shí)清除多余的DEPC過(guò)程中,會(huì)產(chǎn)生乙醇,二氧化碳等其他污染物;

3超濾法:超濾是一種真正能夠從水溶液中清除RNases的方法。

 

四、超濾膜介紹

 

超濾膜被大量用于水處理工程。超濾技術(shù)反滲透預(yù)處理、飲用水處理、中水回用等領(lǐng)域發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。超濾技術(shù)在酒類(lèi)和飲料的除菌與除濁,藥品的除熱原以及食品及制藥物濃縮過(guò)程中均起到關(guān)鍵作用。

超濾過(guò)濾孔徑和截留分子量的范圍一直以來(lái)定義較為模糊,一般認(rèn)為超濾膜的過(guò)濾孔徑為0.001-0.1微米,截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)為1,000-1,000,000 Dalton。嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō)超濾膜的過(guò)濾孔徑為0.001-0.01微米,截留分子量為1,000-300,000 Dalton。若過(guò)濾孔徑大于0.01微米,或截留分子量大于300,000 Dalton的微孔膜就應(yīng)該定義為微濾膜或精濾膜。

一般用于水處理的超濾膜標(biāo)稱(chēng)截留分子量為30,000-300,000 Dalton,而截留分子量為6,000-30,000 Dalton 的超濾膜大多用于物料的分離、濃縮、除菌和除熱源等領(lǐng)域。

 

五、超純水機(jī)推薦

ZYPTF落地式+壓力桶 +軟水器)

產(chǎn)品說(shuō)明:

ZYPFT系列超級(jí)微量型超純水器是新一代秉承“人性化設(shè)計(jì)、高定位標(biāo)準(zhǔn)”研發(fā)生產(chǎn)的超純水機(jī),將城市自來(lái)水純化為符合國(guó)標(biāo)GB/T6682-2008的實(shí)驗(yàn)室一級(jí)和三級(jí)超高純度實(shí)驗(yàn)室用水,基于PLC全自動(dòng)控制及ARM系列單片機(jī)和觸摸屏技術(shù)的人機(jī)界面,實(shí)現(xiàn)圖形顯示制水流程,流量監(jiān)控耗材更換功能,定時(shí)定質(zhì)取水功能,歷史數(shù)據(jù)查詢功能等多項(xiàng)技術(shù),專(zhuān)業(yè)適用于科研分析等高要求實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

技術(shù)指標(biāo):

機(jī)型

I

II

C

臺(tái)上式(T

ZYPFT-I-10/20T

ZYPFT-II-10/20T

ZYPFT-C-10/20T

落地式(L

ZYPFT-I-20/40/60/100L

ZYPFT-II-20/40/60/100L

ZYPFT-C-20/40/60/100L

進(jìn)水水源

總?cè)芙庑怨绦挝锖?/span>TDS200ppm,水壓1.0-5.0kg/cm工作水溫25

制水量

10/20/40/60/100/小時(shí)

出水流速

1.5-2.0/分鐘(水箱儲(chǔ)水時(shí))

RO出水水質(zhì)(μS/cm

電導(dǎo)率<5μS/cm(在線監(jiān)測(cè)),污染物去除率99.5%

UP出水水質(zhì)(MΩ.cm

電阻率18 .25MΩ.cm(在線監(jiān)測(cè))

微顆粒物(0.1um)<1個(gè)/ml、微生物<0.1cfu/ml、重金屬離子<0.1ppb、可溶性硅(以sio2計(jì))<0.01mg/L

吸光度(254nm,1cm光程:≤0.001   可氧化物質(zhì)[以(0)計(jì),㎎/L]: 0.08

陽(yáng)離子含量≤0.1ppb (鐵(Fe)0.005ppb ,銅(Cu)0.005ppb ,鉀(K)<0.02 ppb,鋁(Al)0.005ppb,鋅(Zn)<0.02ppb , 鉻(Cr)<0.005ppb , (Na)0.01ppb;

陰離子含量0.1ppb(氯(Cl)0.01ppb, 亞硝酸根(NO)0.02ppb, 硝酸根(NO)0.02ppb, 硫酸根(SO)0.01ppb);

選型配置

 觸摸屏+MF終端微濾+UV紫外燈

   觸摸屏+MF+UV+UF超濾

 雙顯表+MF終端微濾+UV紫外燈

總有機(jī)碳TOC

     TOC)<3ppb 

TOC)<3ppb   

        TOC)<3ppb 

熱源(內(nèi)毒素)

---------------

           0.001EU/ml

         ---------------

       


ZYPTF臺(tái)上式+無(wú)菌水箱)

24小時(shí)咨詢熱線

028-62568328
聯(lián)系人:楊建 郵箱:3003604611@qq.com 地址:成都市金牛區(qū)金府路799號(hào)1棟1單元27樓13-14號(hào)

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